Prinzip
Celluloseacetat Film Elektrophorese ass eng Elektrophoresemethod mat engem Celluloseacetatfilm als Ënnerstëtzung. D'Phänomen an deem gelueden Partikelen an déi entgéintgesate Elektrode ënner der Handlung vum elektresche Feld bewegen, gëtt Elektrophorese genannt. Well all Protein e spezifesche isoelektresche Punkt huet, wann e Protein an enger Léisung mat engem pH manner wéi säin isoelektresche Punkt plazéiert ass, gëtt de Protein positiv gelueden a sech op déi negativ Elektrode beweegt. Am Géigendeel, et plënnert op de positive Pole. Well d'Geschwindegkeet vun de Proteinmoleküle, déi an engem elektresche Feld bewegen, ass mat hirer Ladung, der Form an der Gréisst vun de Moleküle verbonnen, verschidde Proteine kënnen duerch Elektrophorese getrennt ginn. Serum enthält eng Vielfalt vu Proteinen, déi all isoelektresch Punkte bei pH7.5 oder manner hunn. Wann Serum am pH 8.6 Puffer plazéiert ass fir Elektrophorese ze lafen, sinn all Serumproteine negativ gelueden a wäerte sech op déi positiv Säit am elektresche Feld bewegen. Well verschidde Serumproteine verschidde Ladungen um selwechte pH hunn, sinn d'molekulare Partikelen ënnerschiddlech a Gréisst, an dofir ass d'Migratiounsgeschwindegkeet anescht, a si gi vun der Elektrophorese getrennt. D'isoelektresch Punkten a Molekulare Gewiichter vu Serumproteine ginn an der Tabell hei ënnen gewisen:
| Protein | Isoelektresch Punkten (PI) | Molekulare Gewiicht |
| Albumin | 4,88 | 69 000h |
| α1-gloulin | 5.00 | 200 000 |
| α2-gloulin | 5.06 | 300 000 |
| β-gloulin | 5.12 | 9 000 ~ 150 000 |
| γ-gloulin | 6,85 ~ 7,50 | 156 000 ~ 300 000 |
D'Experiment ass fir verschidde Proteinen am Bluttserum ze trennen mat Celluloseacetat Membran (abbr. CAM) als Ënnerstëtzungsmedien. CAM ass eng Aart vu geschaimte LooseFilm mat gudder Uniform, an d'Dicke ass 0.1mm-1.5mm, wat eng gewësse Waasserabsorptioun huet.
Materialien, Instrumenter a Reagenz fir CAM Elektrophorese
Echantillon:gesond Mënsch Blutt Serum
Instrument:Stroumversuergung DYY-6C, Elektrophoresetank DYCP-38C, superior Probe Laden WD-9404
D'Reagenz
1) Celluloseacetat Membran 7X9cm
2) PH 8.6 Barbitol-Pufferléisung (Ionesch Kraaft 0.05-0.09, et ass 0.06tid Zäit.): Huelt 1,84g Diethylbarbitursäure, an huelt dann 1.03g Diethyl Natriumpentobarbital, füügt e bësse destilléiert Waasser fir ze hëtzen fir opzeléisen, a maacht bis zu 1000 ml;
3) Fleck: Ponceau S 0,2g, Trichloroacetic 3g, add 100ml destilléiert Waasser;
4) TBS/T oder PBS/T: 45ml 95% Ethanol, 5ml Glacial Essig, add 50ml destilléiert Waasser;
5) Botzen Léisung: 70ml waasserdicht Ethanol, 30ml Glacial Essig.
Experimenter Method
1) Bereet d'Membran: Taucht d'Membran an d'Barbitol-Pufferléisung 30min-8h, an huelt se eraus, läscht déi extra Léisung duerch absorbéierend Pabeier.
2) Lueden Echantillon: Ënnerscheeden der rau Säit a glat Säit vun der Membran, a markéiert eng Linn op 1,5 cm Distanz zu der ieweschter Enn op der rauer Säit. Lued Echantillon duerch super Prouf Lueden Outil op der rauer Säit. Bemierkung: D'Proben sollen op der rauer Säit vun der Membran geluede ginn. Nodeems d'Serumproben komplett an d'Membran penetréiert sinn, dréit d'Membran ëm, setzt d'rau Säit (mat Proben) op den Tank erof, an d'Enn mat Proben gëtt an negativ Elektrode gesat.
3) Elektrophorese: Maacht d'Energieversuergung un, 0,4～0.6m A/cm Membran, Lafzäit ass 30-45 min. Nodeems Dir Elektrophorese leeft, schalt d'Kraaft aus.
4) Fleck a propper: Huelt d'Membran aus dem Tank eraus, an dauchtit an d'Faarfléisung fir 5 min, an dann an der Botzléisung ëmmer erëm 3-4 Mol ze botzen, bis d'Hannergrondfaarf kloer ass. D'Serumproteine sollen op de Bands gewise ginn, an normalerweis ginn et fënnef Zonen, déi iewescht Enn vun der markéierter Linn bilden, Albumin, α1-Gloulin, α2-Gloulin, β-Gloulin, γ-Gloulin.
5) Erhaalung: setzen d'dréchen elecrtophoresisbandan der Reinigungsléisung fir 10-15 Minutten, an huelt se dann eraus a setzt se op e proppert Glas, nodeems et dréchent gëtt et zu engem transparenten Filmband.
ExperimentéierenResultat
D'Trennungseffekt vu Serum Echantillon ass gutt, an et gëtt kee Band tailing Phänomen. D'Wiederholbarkeet vun de Resultater variéiert wéinst den Testprozeduren an de Methoden vum Experimenter, an d'Wiederholbarkeet ass héich.
Conclusioun
De schnelle klineschen Elektrophorese Detektiounssystem (Electrophoresis TankDYCP-38C,StroumversuergungDYY-6C a superior Probe Lueden WD-9404) produzéiert vun eisemD'Firma Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdentsprécht den experimentellen Ufuerderungen,and'Resultater sinn reproduzéierbar, einfach a séier, gëeegent firUnterréchtFuerschung.
Peking LiuyiBiotechnology Co., Ltd spezialiséiert op d'Fabrikatioun vun Elektrophoreseprodukter fir d'Liewenswëssenschaftsindustrie, déihuet méi wéi 50-Joer Geschicht a China an d'Firma kann stabil a qualitativ héichwäerteg Produkter op der ganzer Welt ubidden. Duerch Joeren vun der Entwécklung ass et vun Ärem Choix wäert!
Mir sichen elo fir Partner, souwuel OEM Elektrophorese Tank an Distributeuren si begréisst.
Fir méi Informatiounen iwwer eis, kontaktéiert eis w.e.g. per E-Mail[E-Mail geschützt]oder[E-Mail geschützt].
Post Zäit: Nov-14-2022