Hämoglobin Elektrophorese Experiment

Experiment Prinzip

Hämoglobin Elektrophorese zielt fir verschidde normal an anormal Hämoglobine z'entdecken an ze bestätegen.

Wéinst de verschiddene Ladungen an isoelektresche Punkte vu verschiddenen Hämoglobintypen, an enger bestëmmter pH-Pufferléisung, wann den isoelektresche Punkt vum Hämoglobin méi niddereg ass wéi de pH vun der Pufferléisung, dréit Hämoglobin eng negativ Ladung a migréiert an d'Anode wärend der Elektrophorese. Ëmgekéiert bewegt Hämoglobin mat enger positiver Ladung Richtung Kathode.

Ënner enger gewësser Spannung an no enger spezifescher Elektrophoresezäit weisen Hämoglobine mat verschiddene Ladungen a Molekulargewiicht verschidde Migratiounsrichtungen a Geschwindegkeeten. Dëst erlaabt d'Trennung vun ënnerschiddleche Zonen, a spéider kolorimetresch oder elektrophoretesch Scannenanalyse kann op dësen Zonen ausgefouert ginn fir verschidde Hämoglobine ze quantifizéieren. Déi meescht benotzt Method ass pH 8.6 Celluloseacetat Membran Elektrophorese.

Am Zytoplasma ginn Ethylenglycolgruppen (CHOH-CHOH) präsent a Glykogen oder Polysacchariden Substanzen (wéi Mucopolysacchariden, Mucoproteine, Glykoproteine, Glykolipiden, etc.) duerch Periodesch Seier oxidéiert an an Aldehydgruppen (CHO-CHO) ëmgewandelt. Dës Aldehydgruppen kombinéiere mam faarwege purpurroude Schiff-Reagens, a bilden e purpurroude Faarfstoff, deen deposéiert wou Polysacchariden an der Zell präsent sinn. Dës Reaktioun ass bekannt als periodesch Säure-Schiff (PAS) Faarf, fréier als Glycogen-Faarwen bezeechent.

Experimenter Method

Materialien:ZelluloseacetatmemBrane, Elektrophoreseapparat(DYCP-38C a Stroumversuergung DYY-6C), Superior Sample Loading Tool (pipette), Spektrofotometer, kolorimetrische Kuvetten, bufferen.

Buffer:

(1) pH 8,6 TEB Buffer: Gewiicht 10,29 g Tris, 0,6 g EDTA, 3,2 g Borsäure, a füügt destilléiert Waasser op 1000 ml.

(2) Boratbuffer: Gewiicht 6,87 g Borax a 5,56 g Borsäure, a füügt destilléiert Waasser op 1000 ml.

Prozedur:

PReparatur vun Hämoglobin Léisung

Huelt 3 ml Blutt mat Heparin oder Natriumcitrat als Antikoagulant. Zentrifuge bei 2000 U/min fir 10 Minutten an de Plasma ewechhuelen. Wäscht d'rout Bluttzellen dräimol mat physiologeschen Salzlinn (750 U/min, 5 Minutten Zentrifugéierung all Kéier). Zentrifuge bei 2200 U/min fir 10 Minutten an de Supernatant ewechhuelen. Füügt eng gläich Betrag u destilléiert Waasser, füügt dann 0,5 Mol de Volume vu Kuelestofftetrachlorid. Shake kräfteg fir 5 Minutten, an centrifuge dann bei 2200 rpm fir 10 Minutten déi iewescht Hb Léisung fir spéider benotzen ze sammelen.

D'Membran erofsetzen

Schneid d'Zelluloseacetat-Membran a Sträifen vun 3 cm × 8 cm. Soak se am pH 8,6 TEB-Puffer bis komplett gesättegt, huelt se dann ewech a blot mat Filterpabeier trocken.

Spotten

Benotzt eng Pipette fir 10 μl vun der Hämoglobinléisung vertikal op d'Celluloseacetat-Membran (déi rau Säit), ongeféier 1,5 cm vun der Kante ze gesinn.

Elektrophorese

Gitt d'Borat-Pufferléisung an d'Elektrophoresekammer. Plaz d'Celluloseacetat Membran mat der gefleckter Säit um Kathode Enn vun der Chamber. Laf bei 200 V fir 30 Minutten.

Elutioun

D'HbA- an HbA2-Zonen ausschneiden, se an getrennten Reagenzglieser setzen a 15 ml respektiv 3 ml destilléiert Waasser derbäi. Schütt sanft fir den Hämoglobin komplett ze elueren, da mëschen.

Colorimetrie

Null d'Absorptioun mat destilléiert Waasser fir d'Elutiounsléisung a moosst d'Absorbance bei 415 nm.

Berechnung

HbA2(%) = Absorptioun vum HbA2 Tube / (Absorptioun vum HbA Tube × 5 + Absorptioun vum HbA2 Tube) × 100%

Experimentell Resultater Berechnung

Referenzbereich fir pH 8,6 TEB Buffer Celluloseacetat Elektrophorese: HbA > 95%, HbA2 1%-3,1%

Notizen

Elektrophoresezäit sollt net ze laang sinn. D'Zelluloseacetat Membran soll net während der Elektrophorese dréchen. Stop Elektrophorese wann HbA an HbA2 kloer getrennt sinn. Verlängert Elektrophorese kann Banddiffusioun a Verschlechterung verursaachen.

Vermeiden ze vill Prouf ze benotzen. Exzessiv Hämoglobinflëssegkeet kann zu Bandentscheedung oder net genuch Färzen féieren, wat zu falsch erhöhte HbA Niveauen resultéiert.

Vermeiden Kontaminatioun vun der Celluloseacetat Membran mat Proteinen.

De Stroum soll net ze héich sinn; soss, Hämoglobin Bands kënnen net trennen.

Ëmmer Exemplare vun normalen Individuen an néideg bekannt anormal Hämoglobine als Kontrollen enthalen.

Peking Liuyi Biotechnologie fabrizéiert de professionnelle Elektrophoresetank fir Hämoglobin Elektrophorese dat ass de ModellDYCP-38C FotoenCellulose Acetat Membran Elektrophorese Tank, an et ginn zwee Modeller vun der Elektrophorese Stroumversuergung verfügbar fir den Celluloseacetat Membran Elektrophorese TankDYY-2CanDYY-6CStroumversuergung.

Mëttlerweil gëtt Peking Liuyi Biotechnologie Celluloseacetat Membran fir Clienten, an d'Gréisst vun der Celluloseacetat Membran kann personaliséiert ginn. Wëllkomm eis fir Proben a méi Informatioun ze froen.

Peking Liuyi Mark huet méi wéi 50 Joer Geschicht a China an d'Firma kann stabil a qualitativ héichwäerteg Produkter op der ganzer Welt ubidden. Duerch Joeren vun der Entwécklung ass et vun Ärem Choix wäert!

Mir sichen elo fir Partner, souwuel OEM Elektrophorese Tank an Distributeuren si begréisst.

Wann Dir e Kafplang fir eis Produkter hutt, zéckt net eis ze kontaktéieren. Dir kënnt eis Message per E-Mail schécken[E-Mail geschützt]oder[E-Mail geschützt], oder rufft eis w.e.g. un um +86 15810650221 oder add Whatsapp +86 15810650221, oder Wechat: 15810650221