Comet Assay (Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE) ass eng sensibel a séier Technik déi haaptsächlech benotzt gëtt fir DNA Schued ze entdecken an an eenzel Zellen ze reparéieren. Den Numm "Comet Assay" kënnt vun der charakteristescher Koméit-ähnlecher Form, déi an de Resultater erschéngt: de Kär vun der Zell bildt de "Kapp", während déi beschiedegt DNA Fragmenter migréieren, an e "Schwanz" kreéieren deen e Koméit ähnelt.
Prinzip
De Prinzip vum Comet Assay baséiert op der Migratioun vun DNA Fragmenter an engem elektresche Feld. Intakt DNA bleift am Zellkär, wärend beschiedegt oder fragmentéiert DNA an d'Anode migréiert an de Koméit säi "Schwanz" formt. D'Längt an d'Intensitéit vum Schwanz sinn direkt proportional zum Ausmooss vum DNA Schued.
Prozedur
- Zell Virbereedung: Zellen, déi getest ginn, gi mat niddereg-Schmelzpunkt-Agarose gemëscht an op Mikroskop-Rutschen verdeelt fir eng eenheetlech Schicht ze bilden.
- Zell Lysis: D'Rutschen ginn an enger Lysisléisung ënnerdaucht fir d'Zellmembran an d'Nuklearmembran ze entfernen, d'DNA auszesetzen.
- Elektrophorese: D'Rutschen ginn an enger Elektrophoresekammer ënner alkaleschen oder neutralen Bedéngungen plazéiert. Beschiedegt DNA Fragmenter migréieren op déi positiv Elektrode ënner dem Afloss vum elektresche Feld.
- Flecken: No der Elektrophorese ginn d'Rutschen mat engem fluoreszenter Faarfstoff (zB Ethidiumbromid) gefierft fir d'DNA ze visualiséieren.
- Mikroskopesch Analyse: Mat engem Fluoreszenzmikroskop oder spezialiséiert Software ginn d'Koméitformen analyséiert, Parameter wéi Schwanzlängt an Intensitéit gemooss.
Bild vum Biorender
Daten Analyse
D'Resultater vum Comet Assay ginn op e puer Schlësselparameter bewäert:
- Schwanz Längt: Representéiert d'Distanz déi d'DNA migréiert, wat d'Ausmooss vum DNA Schued ugeet.
- Schwäif DNA Inhalt: De Prozentsaz vun DNA deen an de Schwanz migréiert, dacks als quantitativ Moossnam fir DNA Schued benotzt.
- Olive Tail Moment (OTM): Kombinéiert béid Schwanzlängt a Schwanz DNA Inhalt fir eng méi ëmfaassend Mooss vum DNA Schued ze bidden.
Uwendungen
- Genotoxicity Studien: De Comet Assay gëtt wäit benotzt fir d'Effekter vu Chemikalien, Drogen a Stralung op Zell-DNA ze bewäerten, sou datt et e Schlësselinstrument fir Genotoxicitéitstest gëtt.
- Ëmwelttoxikologie: Et hëlleft bei der Analyse vun den Impakt vun Ëmweltverschmotzungen op d'DNA vun Organismen, a liwwert Abléck an d'Ökosystemsécherheet.
- Medizinesch a klinesch Fuerschung: De Comet Assay gëtt benotzt fir DNA Reparaturmechanismen, Kriibs an aner DNA-relatéiert Krankheeten ze studéieren. Et evaluéiert och den Impakt vu Kriibstherapien wéi Radiotherapie a Chemotherapie op DNA.
- Liewensmëttel a Landwirtschaft Wëssenschaften: Benotzt fir d'Sécherheet vu Pestiziden, Nahrungsadditive an aner Substanzen ze bewäerten an hir gëfteg Effekter an Déieremodeller ze studéieren.
Virdeeler
- Héich Sensibilitéit: Kapabel fir niddereg Niveauen vun DNA Schued z'entdecken.
- Einfach Operatioun: D'Technik ass einfach, sou datt et gëeegent ass fir High-Throughput Screening.
- Breet Applikatioun: Et kann op verschidden Zelltypen applizéiert ginn, dorënner Déieren- a Planzezellen.
- Quantifikatioun Erausfuerderungen: Wärend qualitativ Daten iwwer DNA Schued ubitt, hänkt d'quantitativ Analyse staark op Software a Bildanalysetechniken of.
- Experimentell Konditiounen: Resultater kënne beaflosst ginn duerch Faktoren wéi Elektrophoresezäit a pH, déi virsiichteg Kontroll vun experimentellen Bedéngungen erfuerderen.
Aschränkungen
De Comet Assay ass e wäertvollt Tool an der biomedizinescher Fuerschung, der Ëmweltwëssenschaft an der Drogenentwécklung wéinst senger Flexibilitéit an héijer Empfindlechkeet beim Erkennung vun DNA Schued a Reparatur. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)bitt horizontal Elektrophoresekammer fir Koméitenanalyse. Wëllkomm mat eis ze kontaktéieren fir ze diskutéieren iwwer deKoméit AssayProtokoll.
Beijing Liuyi Biotechnology Co Ltd (Liuyi Biotechnology) huet spezialiséiert op der Fabrikatioun vun Elektrophoreseinstrumenter fir méi wéi 50 Joer mat eisem eegene professionnelle techneschen Team a R&D Zentrum. Mir hunn zouverlässeg a komplett Produktioun Linn vum Design ze Inspektioun, a Lager, souwéi Marketing Ënnerstëtzung. Eis Haaptprodukter sinn Electrophoresis Cell (Tank / Chamber), Electrophoresis Power Supply, Blue LED Transilluminator, UV Transilluminator, Gel Image & Analysis System etc. Mir liwweren och d'Laboinstrumenter wéi PCR Instrument, Wirbelmixer an Zentrifuge fir Labo.
Wann Dir e Kafplang fir eis Produkter hutt, zéckt net eis ze kontaktéieren. Dir kënnt eis Message per E-Mail schécken[E-Mail geschützt]oder[E-Mail geschützt], oder rufft eis w.e.g. un um +86 15810650221 oder addéiert Whatsapp +86 15810650221, oder Wechat: 15810650221.
Scan w.e.g. den QR Code fir op Whatsapp oder WeChat derbäi ze ginn.
Post Zäit: Sep-20-2024